4.7.3 COLLECTE DE SANG SUR PAPIER FILTRE

Protocole simple pour la collecte de sang sur papier filtre:

1. Un papier Whatman No. 3 de chromatographie est découpé en morceaux de 14 x 9 cm, puis conservé dans des sachets plastique étanches, 10 feuilles par sachet. Pour usage en milieu tropical humide, il est conseillé de traiter la feuille de papier à l'aide de fungicide (par exemple 1/10.000 de thiomersal ou Merthiolate), puis de bien la sécher.

2. Le sang est prélevé au doigt ou à l'oreille. Laisser tomber des gouttes de sang sur le papier filtre, sans toucher le papier. Collecter au moins deux ou trois spots, d'environ 50 µl chacun, de chaque patient. Il est parfois nécessaire de mettre plus d'une goutte de sang sur chacun des spots, de façon à ce que la tache ait environ 1 cm de diamètre. Chaque feuille peut être utilisée pour la collecte de plusieurs série d'échantillons (maximum 5 par feuille), à condition de bien marquer chaque série (au crayon, directement sur la feuille) à l'aide d'un numéro de référence.

3. Les feuilles de papier filtre doivent être protégés de la poussière et des mouches pendant le séchage à température ambiante (éviter d'exposer directement au soleil). Après séchage pendant plusieurs heures, les feuilles sont transférrées dans des sacs plastiques et scellées. Il est possible de les conserver pendant plusieurs semaines à température ambiante (mais préférable de les conserver au froid).

4. Une fois de retour au laboratoire de sérologie, le disque standard est découpé à l'aide d'une poinçonneuse calibrée: la taille du disque de papier contenant la tache de sang est l'équivalent de 50 µl de sang. Après élution dans 0.4 ml de tampon de dilution, une dilution finale de 1/16 est obtenue.

5. Une technique un peu précise (mais souvent plus longue et difficile à exécuter sur le terrain) consiste à déposer des gouttes de 50 µl de sang, à l'aide d'une pipette ou d'un tube capillaire, sur le papier filtre (ceci évite d'avoir à utiliser une poinçonneuse calibré au laboratoire).